Octet：疫苗研发的C位技术

新冠病毒的肆虐引发了对疫苗的迫切需要，疫苗研发从常规的8~10年缩短至1~2年，对加速整个疫苗研发及工艺流程提出了新的技术要求。作为疫苗研发的神器，Octet®分子互作分析系统在新冠疫苗研发中大显神威，知名的几个新冠疫苗研发过程中都有它的身影，而且Octet®采用的生物层干涉（BLI）技术也是美国药典中用于结合活性和定量检测的标准方法，能够从以下几个方面加速疫苗研发：

疫苗的快速浓度测定

疫苗的结合活性研究

疫苗效果评价和机制研究

残留物测试

疫苗浓度的快速测定

将针对疫苗的受体或抗体固化在传感器上，然后快速检测疫苗效价（浓度），整个实验可以在10分钟内完成，检测浓度范围在0.1 - 1000 ug/mL，覆盖疫苗生产过程中的浓度范围，样品往往不需要稀释。目前BLI技术广泛用于HPV以及流感等疫苗的浓度测定，非常适合疫苗生产的中间过程以及成品快速QC。

只需要四步：

将能够结合病毒的受体或者抗体固化在传感器上（比如唾液酸糖是流感病毒的受体），1-3分钟；

用样品的基质平衡， 1-2分钟；

结合含有分析物的样品，2-5分钟；

分析：根据结合曲线的起始斜率计算样品浓度。

新冠疫苗结合活性研究

基于重组蛋白或者mRNA的新冠疫苗一般是Spike蛋白结构域，与受体ACE2的结合活性可反映其构象的正确性，是产生中和抗体的前提。Octet®在测结合活性方面具备更多优势：

实时非标记，直接检测疫苗和受体的结合，没有洗涤步骤的干扰

测试速度快，一般10分钟内结束

可以计算结合速率常数和解离速率常数，对结合活性更加定量化

与其他技术相比，无流路，操作简便，通量高，维护简单，耗材便宜

Novavax公司的NVX-CoV2373是一种新冠纳米颗粒疫苗，由三聚体的全长的SARS-CoV-2的S蛋白和Matrix-M1佐剂组成，已获批上市。S1/S2亚基剪切位点682-RRAR-685突变到682-QQAQ-685，以及位于CH的986/987位氨基酸残基突变成了脯氨酸。Octet®检测该疫苗与ACE2的结合是非常强的，解离明显慢于野生型S蛋白。

mRNA新冠疫苗BNT162b2（辉瑞&BioNTech），也使用Octet®检测其表达产物与ACE2的亲和力（nM级别），并且和已知中和抗体B38也有结合，说明其维持了中和抗体表位。所以，Octet®可以通过检测结合活性来对mRNA疫苗的基因序列进行筛选。

疫苗评价——

血清中抗体效价的确定

针对疫苗的免疫血清的效价测试也是判断疫苗免疫原性的重要指标。一般将疫苗固化在传感器上，直接检测不同稀释度的免疫动物/人血清，快速检测血清中抗体的效价，并可以通过计算解离常数或者结合信号获知抗体的结合能力。传统方法只能获得效价，而无法获得抗体的结合能力。Octet®可以在1个小时内完成80份血清样品的检测。

疫苗评价——

保护性抗原表位检测

通过检测疫苗与一系列已知表位的中和抗体的亲和力，获知疫苗是否保持了正确的构象，并判断诱导中和抗体表位的能力。主要用于亚单位疫苗和VLP疫苗。